产品货号:
LA10996
中文名称:
全血基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
Blood DNA Genomic Kit
产品规格:
50T|200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用高效、专一的吸附柱,特异性结合核酸分子,去除杂质,提取血液中的基因组DNA。提取的基因组DNA纯度高,片段大,质量稳定可靠。使用本试剂盒得到的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
组分 | 50T | 200T |
Buffer CL | 60mL | 240mL |
Buffer TE | 60mL | 240mL |
Buffer GP | 15mL | 50mL |
Buffer GB | 15mL | 50mL |
Buffer GD | 13mL | 52mL |
Buffer PW | 15mL | 50mL |
Buffer EB | 12mL | 50mL |
Proteinase K | 1mL | 4ch1mL |
纯化套件(吸附柱+收集管) | 50套 | 200套 |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:室温,有效期一年。
- 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
- 若有的缓冲液出现沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
- 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心,速度为12000rpm(~13400×g)。
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
- 样品处理
- 含无核红细胞的血液样品(如人血液)(本产品适用于处理已添加抗凝剂的100μL~1mL血液样品):当血液样品体积小于200μL时,可加缓冲液GP补足体积至200μL,再进行下一步实验(如血液样品体积为200μL,可直接进行下一步实验,不需加入GP)。
- 含无核红细胞的血液样品:当血液样品体积超过200μL时,需用细胞裂解液CL处理,具体步骤如下:
在样品中加入1~2倍体积的Buffer CL,充分混匀,室温放置1min,10000rpm离心1min,弃上清。用500μL Buffer TE重悬沉淀,10000rpm离心1min,弃上清(若沉淀量较多,可再用Buffer TE洗涤一次沉淀),向沉淀中加入200μL Buffer GP,混匀。 - 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5~20μL,可加缓冲液GP补足200μL后进行后续的裂解步骤。
- 凝固血块:取0.1g凝固血块,用液氮充分研磨,加入100μL Buffer CL,充分混匀,室温放置1min,10000rpm离心1min,弃上清。用500μL Buffer TE重悬沉淀,10000rpm离心1min,弃上清(若沉淀量较多,可再用Buffer TE洗涤一次沉淀),向沉淀中加入200μL Buffer GP,混匀。
注意:如果需要去除RNA,可加入4μL RNase A(100mg/ml)溶液(客户自备),振荡15sec,室温放置5min。
- 含无核红细胞的血液样品(如人血液)(本产品适用于处理已添加抗凝剂的100μL~1mL血液样品):当血液样品体积小于200μL时,可加缓冲液GP补足体积至200μL,再进行下一步实验(如血液样品体积为200μL,可直接进行下一步实验,不需加入GP)。
- 加入20μL Proteinase K(20mg/ml)溶液,混匀。
- 加入200μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,56℃放置10min,其间颠倒混匀数次。
- 加入200μL无水乙醇,充分振荡混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取和应用。
- 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱G1中(吸附柱放入收集管中),静置2min,12000rpm离心30sec,倒掉废液,将吸附柱G1放回收集管中。
- 向吸附柱G1中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检査是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30sec,倒掉废液,将吸附柱G1放入收集管中。
- 向吸附柱G1中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检査是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30sec,倒掉废液,将吸附柱G1放入收集管中。
- 重复操作步骤7。
- 将吸附柱G1放回收集管中,12000rpm离心2min,倒掉废液。将吸附柱G1置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。 - 将吸附柱G1转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50~200μL洗脱缓冲液EB,室温放置2~5min,12000rpm离心1min,将溶液收集到离心管中。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μL,体积过小影响回收效率。为増加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱G1中,室温放置2min,12000rpm离心1min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
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